巧克力平板培养基主要用于 培养嗜血杆菌（Haemophilus spp.）和奈瑟氏菌属（Neisseria spp.）等需要维生素K和X因子的细菌 。这种培养基因其颜色而得名，含有添加了血液的琼脂，血液中的血红蛋白在消化过程中可以提供必要的生长因子，如维生素K和X因子，从而促进这些细菌的生长。此外，巧克力平板也用于培养其他需要特定生长因子的细菌，如淋病奈瑟菌（Neisseria gonorrhoeae）。

巧克力平板培养基的制备方法通常包括将蛋白胨、牛肉浸出液、氯化钠、琼脂和脱纤维羊血混合后加热溶化，校正pH，高压灭菌后加入无菌脱纤维血液，摇匀后置90℃水浴中加热，使培养基呈巧克力色后取出，倾制平板。

在医学和生物研究等领域，巧克力平板被广泛使用，特别是在分离培养病原性奈瑟氏菌和嗜血杆菌属等细菌方面。